Immunogenicitetsanalyserär väsentliga i klinisk läkemedelsutveckling, särskilt för bioterapeutiska produkter. Trots regulatorisk fokus på kliniska krav är icke-klinisk immunogenicitetsbedömning fortfarande kritisk under specifika omständigheter. Enligt ICH S6 bör icke-klinisk immunogenicitet utvärderas när det finns betydande farmakodynamisk aktivitetsförändring eller när läkemedelsexponeringen förändras utan farmakodynamiska markörer eller immun-medierade svarsindikatorer.
Minimistrategikonsensus av European Bioanalysis Forum (EBF)
EBF etablerade en arbetsgrupp 2016, vilket resulterade i en konsensus om minimala strategier för icke-klinisk immunogenicitetsutvärdering. Nyckelparametrar inkluderar SCP-utvärdering, känslighet, drogtolerans och precision:
1. Cut-av värden:För screeningtrösklar rekommenderas en falsk positiv frekvens (FPR) på 0,1-1 % utan bekräftande test. En 0,1 % FPR hjälper till att utesluta falska positiva effekter nära SCP-signalen, och detekterar effektivt relevanta icke-kliniska immunsvar. Genom att följa 3R-principen kan SCP bestämmas med färre individuella prover, helst 15-30, vilket genererar 60 datapunkter (t.ex. 30 prover analyserade två gånger eller 15 prover analyserade fyra gånger). FPR-bekräftelse före dosering av prov är onödig på grund av dess begränsade icke-kliniska relevans.
2. Känslighet:Känsligheten bör bedömas inom en enda analyssats. MRD bör helst vara under 100, med känslighet under 1000 ng/ml. Enligt NMPA 2021-riktlinjerna bör känsligheten nå 250-500 ng/ml, med en känslighet under 100 ng/ml att föredra om det är möjligt. LPC-koncentrationen kan ställas in nära 2-3 gånger SCP-signalen utan omfattande statistisk analys.
3. Precision:Precisionen bör utvärderas över tre analyssatser, var och en inklusive sex uppsättningar av oberoende beredda positiva kontroller vid tre koncentrationsnivåer (HPC, MPC, LPC) och sex uppsättningar negativa kontroller (NC).
4. Läkemedelstoleransnivåer:Läkemedelstolerans bör utvärderas vid LPC-nivåer (eller 1000 ng/ml positiv kontroll) för att säkerställa att metoden kan detektera ADA vid förväntade läkemedelsnivåer i icke-kliniska studier.
Valfria valideringsparametrar inkluderar selektivitet, specificitet, titrar och stabilitet, skräddarsydda för individuella projektbehov.
Att ta itu med industrins utmaningar
"Minimumstrategin" står inför praktiska implementeringsutmaningar, särskilt på grund av branschens långvariga beroende av klinisk vägledning för icke-kliniska immunogenicitetsstudier. Till exempel tvekar branschen ofta att anta strategier som "screening endast med 0,1-1 % FPR utan bekräftande tester." Ändå är det fortfarande avgörande att definiera gränsvärden, känslighet, drogtolerans och precision.
Rekommendationer för icke-kliniska immunogenicitetsanalyser
Med tanke på den erkända bristen på översättning mellan icke-kliniska och kliniska data, rekommenderar EBF följande:
1. Fall-av-Fallbedömning:Bedömningar av icke-kliniska anti-läkemedelsantikroppar (ADA) bör baseras på vetenskapliga skäl och datanytta, snarare än att vara ett standardkrav.
2. Farmakokinetiska/farmakodynamiska (PK/PD) studier:Dessa studier, utförda före GLP-toxikologi, kan ge insikter om immunsvar men har begränsat värde.
3. Toxikologistudier:Det primära målet är att påvisa tillräcklig exponering och bedöma resulterande patologier och deras reversibilitet, och definiera inga effektnivåer och säkerhetsmarginaler för klinisk användning. ADA kan eller kanske inte påverkar TK/PD eller orsaka observerade patologier.
4. Beslutsfattande:Sannolikheten att generera ett immunsvar in vivo bör vägleda analysutvecklingsaktiviteter, balansera affärsrisker och sponsra tidslinjer.
Immunogenicitetsstrategier:
- Bankprover och utveckla/validera analyser endast om TK/PD och säkerhetseffekter observeras.
- Utveckla analyser och påbörja validering/testning av observerade effekter på TK/PD och säkerhet.
- Utveckla och validera proaktivt analyser baserat på affärsrisker och resurser.
Ett slankt tillvägagångssätt kan användas för analysvalidering, där man undviker de fullständiga kraven för kliniska analyser och tillämpar 3R-principer. Screeninganalyser med stringenta skärpunkter (0,1-1 % FPR) eller signal-/brusmetoder kan räcka för provanalys.
Genom att anta dessa optimerade strategier kan den icke-kliniska immunogenicitetsutvärderingen bli mer effektiv och anpassad till vetenskapliga och regulatoriska förväntningar, vilket i slutändan förbättrar utvecklingen av bioterapeutiska produkter.
